培養基中添加綠茶浸提物對果蠅壽命的影響因素 培養基中添加綠茶浸提物怎麼影響對果蠅的壽命

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                      培養基中添加綠茶浸提物對果蠅壽命的影響

摘要:綠茶浸提物中含有豐富的茶多酚、咖啡堿、茶氨酸等有機物，具有很強的抗氧化性，有清除體內自由基的作用，本試驗以果蠅為試驗材料，對其進行不同濃度綠茶浸提物抗衰老、測定繁殖力試驗，統計數據，與空白對照組對照，進行結果分析。結果表明，采用較低濃度的綠茶浸提物對果蠅壽命有不同程度的延長作用，對果蠅的生殖力有不同程度的提高，果蠅子代蛹數明顯增加，這說明綠茶浸提物具有延緩衰老和提高果蠅生殖力的作用。另外，較高濃度的綠茶浸提物對果蠅壽命和生殖力作用不明顯，高濃度的綠茶浸提物對果蠅壽命和生殖力沒有明顯的負麵作用。通過本試驗，結合相關文章，我們認為綠茶對果蠅以及人類健康具有積極的作用。

關鍵詞:綠茶;白眼果蠅;壽命;繁殖力;抗衰老

The Influence of Green Tea Extractionadded to the Medium

onLife-spanof Drosophila

Abstract:Organic matter which abundant in the exaction of green tea such as Tea Polyphenols (TP), Caffeine and theanine could resists oxidizing effectively and eliminates the free radicals in vivo. White-eye Drosophila used as experimental animal was exposure to different concentration of the exaction of green tea. The result indicates that lowconcentration of green tea can prolong the life ofwhite-eye Drosophila and enhance its ability of reproduction. With highconcentration, the effect onreproductive capacity of the white-eyes Drosophila can’t be detected. Even with very highconcentration, no negating effect appears. Through this experiment and related articles, we confirm that green tea is beneficial toDrosophila, also to human beings.

Key words:green tea white eyes drosophila life-span ability of reproduction anti-ageing

1引 言

綠茶，又稱不發酵茶，在中國有悠久的曆史。從公元8世紀發明蒸青製法開始，到12世紀又發明炒青製法，綠茶加工技術已比較成熟，一直沿用至今，並不斷完善。

綠茶浸提物中含有豐富的茶多酚、咖啡堿、茶氨酸等有機物，具有很強的抗氧化性，有清除體內自由基的作用，對防衰老、防癌、抗癌、殺菌、消炎等均有特殊效果，為其他茶類所不及。總體上來說綠茶對人類的健康有降脂減肥，防止心腦血管疾病、抗毒滅菌、防癌、防腦中風、延長壽命等作用。

無錫世紀生物工程有限公司研究員戈宇對綠茶提取物進行了長期的研究。他提出了綠茶的四點重要作用。（1）綠茶提取物對油脂的抗氧化作用非常有效。（2）綠茶提取物具有抑製細菌生長的作用，防止食品腐敗變質。（3）綠茶提取物對食品中的色素和維生素類具有保持作用，既可防止食品的退色，又可起到天然色索的部分作用，有效地防止色素和維生素類降解和破壞。（4）綠茶提取物是具有消除食品異味作用的天然消臭劑。

關於果蠅壽命的研究已經很多，有關綠茶對其壽命影響的研究尚未有過，主要是一些環境因素以及其他種屬的植物葉片成分對其壽命的影響，比如果蠅培養效果的影響因子分析、培養果蠅的最佳生態因子研究、厚樸酚對果蠅壽命和生殖力的影響、山苦茶對果蠅壽命影響的研究等。

針對實驗室飼養果蠅常出現的發育遲緩、繁殖慢、生長周期長，以及因汙染導致死亡等問題，韶關學院的彭曉雲、張明、許東祝教授[1]對影響果蠅生活史和生活環境的培養條件進行了長期的研究，就其對果蠅培養的影響因子做了分析。就果蠅培養器具、培養基配方、培養溫濕度等影響果蠅培養效果的因子進行試驗分析，結果說明在23℃溫度、相對濕度50%、合適的培養基是果蠅培養的最佳環境。

菏澤學院王轉斌、曲誌才就培養果蠅的最佳生態因子[2]進行了研究。研究了飼養空間、溫度、光照和飼料成分等生態因子對野生型黑腹果蠅發育和繁殖的影響，結果表明：除光照時間外，其他因子對果蠅的生長、繁殖都有明顯的影響，果蠅繁殖的子代數量隨飼養空間的增大而增加，最適培養溫度為25～28℃，飼料中酵母粉最適用量為常規用量的3～4倍，糖含量高或低都不利於果蠅的發育和繁殖。

以上是果蠅生活環境對其生長發育的影響，本試驗借鑒他們的研究成果，調節果蠅生長發育的外界條件，從而使試驗能夠順利進行。下麵幾個試驗研究是某種藥物或添加劑對果蠅的影響。

從中藥中提取的厚樸酚具有很強的抗氧化性，具有延緩衰老和促進果蠅的繁殖能力，提高生育力和生命活力的作用。上海大學生命科學學院王沂、吳翔教授[3]，複旦大學生命科學學院翁新楚教授就厚樸酚對果蠅壽命和繁殖力的影響展開了研究。從中藥厚樸中提取的厚樸酚(magnolol)具有很強的抗氧化性，對其進行黑腹果蠅抗衰老和繁殖力試驗。結果表明，分別采用0.02 %、0.03%和0.05%濃度的厚樸酚對果蠅壽命均有不同程度的延長作用，平均延壽率從8.7%到18.5%;對果蠅繁殖力均有不同程度的提高，果蠅子代蛹數顯著增加，平均增殖率從70.0%到268.2%，成蟲果蠅數量也顯著增加，平均增殖率從145.3%到541.5%。表明厚樸酚具有延緩衰老和促進果蠅的繁殖能力，提高生育力和生命活力的作用。

海南醫學院林海、徐生淦教授，海南大學生物研究中心王瓊梅教授[4]就山苦茶對黑腹果蠅壽命影響[5]展開研究。試驗觀察了山苦茶的醇提取物[6][7]對黑腹果蠅（Drosophila melanogaster）品係壽命的影響。試驗設置了培養基含山苦茶1:1乙醇提取物為0.5%、1.0%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%的六個試驗組和純培養基為對照的對照組。實驗結果顯示各劑量與對照組之間平均壽命無顯著性差別。

福建師範大學老師黃代青、肖華山、傅文慶，中科院生物物理研究所教授趙保路、忻文娟[8]研究了桑葉提取液對體外氧自由基的清除作用以及對果蠅壽命的影響。作者應用化學發光法研究了桑葉提取液對體外氧自由基發生係統:黃嘌呤氧化酶體係產生的超氧陰離子，Fenton體係產生的羥自由基和用過硫酸按N′, N′, N′, N′——四甲基乙二胺體係產生的氧自由基的清除作用。同時研究了高濃度桑葉提取液對果蠅壽命的影響。結果表明，桑葉提取液對上述係統產生的氧自由基中的羥自由基具有相當強的清除作用。在劑量比中醫大辭典規定的大3倍以上時並不降低雌雄果繩的平均壽命，且對雌雄果繩的最高壽命均有一定程度的提高。

王丙雲、陳嘩教授的江西麥飯石對果蠅壽命影響[9]研究，選用紅眼果繩為材料，在其培養基中添加（0%、0.5%、1%、2%、4%)的麥飯石粉，研究了江西麥飯石對果繩平均壽命、最高壽命、半數死亡天數的影響。實驗結果表明:江西麥飯石能延長果蠅的壽命。

曲阜師範大學生物係教授王轉斌、顏梅的鈣離子對果蠅生育力和壽命影響[10]，以果蠅為試驗材料，探討了鈣離子對果蠅生育力和壽命的影響，結果發現含鈣化合物加入到培養基後，果蠅後代的生育力和壽命均隨著鈣離子濃度的升高而降低。

   通過以上科學家的研究，能夠知道適宜的條件及添加劑有利於果蠅的生長繁殖。那麼綠茶浸提物作為一種添加劑對果蠅有什麼影響呢？

本試驗在總結前人研究成果的基礎上，以果蠅為試驗材料，觀察其在不同濃度綠茶浸提物培養基中的壽命和生殖力變化趨勢，判斷不同濃度綠茶浸提物對果蠅壽命及生殖力的影響。

2材料與方法

2.1試驗材料

試驗材料：白眼果蠅[11]，其形體小，繁殖率高，生長迅速，生活周期短，以此為試驗材料，便於試驗研究。

試驗儀器及用品[12]：陶瓷缸、毛筆、鑷子、濾紙、放大鏡、玻璃棒、恒溫培養箱、果蠅培養瓶（廣口瓶）、麻醉瓶、滅菌鍋等。

試驗藥品[13]：綠茶（貴州鳳岡縣仙人嶺有機茶廠生產的永安春綠茶），玉米粉，白糖，丙酸，瓊脂條，酵母，乙醚等。

2.2試驗方法

2.2.1果蠅培養基的配製

（1）培養基配製藥品用量[14]：純淨水150ml，玉米粉9g，白糖6g，丙酸0.5ml，瓊脂條1.2g，另加適量的酵母粉。

（2）分別配製對照組培養基[15]和0.2g／100ml、0.5g／100ml、1g／100ml、2g／100ml、4g／100ml的綠茶浸提物培養基。

將1.2 g瓊脂放在50 mL純淨水中,煮沸,直到瓊脂完全溶解,再加入6 g白糖,調勻,繼續加熱。另把9 g玉米粉加入50 mL蒸餾水混合後,倒入正在加熱的瓊脂糖溶液中,並加入0.5ml苯甲酸,均勻攪拌,煮沸2～3 min成糊狀,稍微冷卻後，分別加入50ml 0.2g／100ml、0.5g／100ml、1g／100ml、2g／100ml、4g／100ml的綠茶浸提物溶液，對照組加入50ml純淨水，攪拌均勻。趁熱注入到潔淨、幹燥、消毒過的培養瓶中,使培養基在瓶底的厚度約2 cm(注意瓶口和瓶壁上不要被培養基沾汙)。可把一潔淨紙片的一端插到糊狀的培養基裏,以擴大果蠅活動的場所。待培養基稍冷卻後,在瓶口加棉塞,以免積水。棉塞一定不要塞得太緊,以便空氣流通。培養基冷卻成固體後,即可用來飼養果蠅。

   配製培養基要注意的問題：

配製培養基時，應煮沸後保持沸騰幾分鍾，否則培養基容易稀鬆。加入丙酸時注意屏住呼吸，因為酸遇熱揮發，酸味很濃。接種前需加酵母粉[16]，果蠅是以酵母菌為食物。

對照組和試驗組培養基編號：

對照組  0.2g／100ml 0.5g／100ml  1g／100ml  2g／100ml   4g／100ml

01；02；03  11；12；13     21；22；23    31；32；33   41；42；43    51；52；53

2.2.2果蠅的培養

(1)果蠅的麻醉[17]：

對果蠅進行麻醉處理，是進行性狀觀察的必須步驟。麻醉程度是試驗成功與否的關鍵，麻醉不夠，果蠅就會飛掉，麻醉過頭又會殺死果蠅。麻醉時注意掌握時間，時間過長，易麻醉致死。標準為：果蠅雙翅外展45°為死亡。麻醉狀態通常可以維持5到10分鍾。如果觀察中蘇醒過來，可以進行補救麻醉，即用一平皿，內帖一帶乙醚的濾紙條，罩住果蠅形成一麻醉小室。

(2)果蠅雌雄的判斷[18]：

性狀                      雌果蠅                       雄果蠅

大小

大

小

形態

腹部寬厚呈卵圓狀，腹端稍尖

腹部相對窄小呈柱狀，腹部呈鈍圓形

顏色

腹部背麵外端呈寬度相近的5條黑色條紋

腹背隻能看到3條條紋，上部兩條窄一些，後一條寬且延伸至腹麵，呈一明顯黑斑

性梳

無性梳

在第一對足的跗節基部有一黑色鬃毛結構，形似一小梳，即有性梳

（3）處女蠅的獲取[19]：

雌果蠅生殖器官有受精囊，可保存交配所得的大量的精子，能使大量的卵細胞受精。因此，在做果蠅雜交實驗的時候，雌果蠅必須是處女蠅，保證實驗結果的可靠性。雌果蠅自羽化開始10小時之內尚未成熟而無交配能力。選擇處女蠅時，先把培養瓶中的老果蠅全部除去，收集10小時之內羽化出來的新果蠅，麻醉後用放大鏡在白瓷板上將果蠅雌雄分開，這時得到的雌果蠅應該全部都是處女蠅。如果要驗證選取的處女蠅是否準確，先不要放入雄蠅，3天後看雌蠅是否產卵，如果產卵就不是處女蠅了。當證明確實是處女蠅的情況下再放入。

（4）果蠅培養：

用毛筆將果蠅轉入培養瓶中。每個培養瓶雌雄果蠅各6隻。將培養瓶放入25℃恒溫培養箱中培養。每周周日下午6點準時將果蠅轉移到新鮮的與原培養瓶相同的培養基中培養，並保存原培養基，將果蠅培養瓶放入25℃恒溫培養箱中培養。

2.2.3果蠅壽命觀察與生殖力統計

每隔三天觀察培養瓶中果蠅成蟲的數量並放生，直到果蠅培養瓶中無果蠅孵出，大約一周以後即沒有果蠅的孵化。統計果蠅成蟲的數量[20]。原培養瓶中親本果蠅直到有半數死亡[21][22]，記錄此時的時間，即果蠅半數死亡的果蠅壽命[23]。

3結果與分析

3.1綠茶浸提物對果蠅壽命的影響

由表3-1和圖3.1可以看出：在低濃度的綠茶浸提物範圍內，隨著濃度的不斷提高，果蠅壽命不斷延長，由26.3天提高到31.7天。隨著綠茶浸提物濃度的進一步加大，果蠅壽命有縮短的趨勢。對比對照組的果蠅壽命，縮短的趨勢不明顯，基本上沒有太大影響。說明綠茶浸提物對果蠅有延長壽命的作用。

3.2綠茶浸提物對果蠅生殖力的影響

綠茶浸提物對果蠅生殖力的影響如下所示：

由表3-2和圖3.2可以看出：在一定濃度範圍內，隨著綠茶浸提物濃度的不斷提高，果蠅生殖力不斷提高，由337上升到379，在0.5g／100ml時生殖力達到最高，隨後生殖力逐漸降低，在4g／100ml時，有明顯下降趨勢。說明低濃度綠茶浸提物對果蠅生殖力有促進作用，高濃度綠茶浸提物對果蠅生殖力有抑製作用。

3.3綠茶浸提物對果蠅壽命及生殖力的影響對照

圖3-3壽命（天）與生殖力（隻）對照圖

chart3-3 The contrast of Drosophilalife-span andreproduction ability

由圖3-3綠茶浸提物對果蠅壽命及生殖力的影響對照圖可以看出，綠茶浸提物對果蠅壽命影響不明顯，曲線基本呈現水平狀態，但能稍微觀察到有上升的趨勢，說明低濃度的綠茶浸提物（0.2g／100ml、0.5g／100ml、1g／100ml）對果蠅有延長壽命的作用，濃度稍高（2g／100ml、4g／100ml）則對果蠅壽命影響不明顯。綠茶浸提物對果蠅生殖力影響明顯，曲線突起，由337上升到379，說明適宜濃度的綠茶浸提物（0.5g／100ml）對果蠅生殖力有較大程度的提高，濃度過高則不利於果蠅生殖力的提高。

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